Pigūs DIY GFP (žaliosios fluorescencinės baltymų) apšvietimas - 💡 Fix My Ideas

Pigūs DIY GFP (žaliosios fluorescencinės baltymų) apšvietimas

Pigūs DIY GFP (žaliosios fluorescencinės baltymų) apšvietimas


Autorius: Ethan Holmes, 2019

Tai nebuvo kažkoks siaubingas fetišas, kuris mane suprato „The Worm Breeder's Gazette“.Greičiau jis kalbėjo apie Kathryn Hedges - protingą, aistringą, gerai žinomą mokslininką ir menininką - apie „Gazette“ patarimai, kaip padaryti, kad GFP apšvietimas būtų pigus. GFP arba žali fluorescencinis baltymas yra fluorescencinis žymuo, dažnai naudojamas molekulinėje biologijoje ir neurologijoje.

Humbolto valstybinio universiteto magistrantūros studijų metu Kathryn, kaip ir daugelis kitų mokslininkų, buvo sušvelninta dėl biudžeto mažinimo ir sunkumų ieškant paramos. Norėdamas tęsti savo darbą su nematodų neuronais grynaisiais pinigais, kai ji turėjo 11-ąją valandą naujos įrangos poreikio, Kathryn išlaisvino savo „galėtume pamatyti, kaip mes galime tai padaryti geriau ir pigiau“. GFP šviestuvas į geresnę ir vertingesnę sistemą, galinčią vizualizuoti neuronus mažuose kirminuose tik 1 milimetro ilgio.

Kodėl tai buvo svarbu Kathrynui? Jos žodžiais tariant, „vienas iš mano padermių pasirinko prieš GFP, jei nesurinkiau ryškiausių kirminų kiekvienos kartos. Be būdo pamatyti „GFP“ ant „išsklaidymo“ mikroskopo, kur aš paėmiau atskirus kirminus su nedideliu vielos mentele, negalėjau užtikrinti, kad visi jų palikuonys būtų fluorescenciniai, o tai yra problema, kai bandau pamatyti, ar gydymas pažeidžia juos, kad jie prarastų fluorescenciją. “

Rezultatas: „Vieninteliai mikroskopai, kuriuos turėjome su GFP pajėgumais, netinkami didinti kirminus, juos perkeldami, o tinkamos apimties pirkimas kainuotų tūkstančius dolerių. Mano biudžete liko 750 dolerių, taigi aš praleidau apie 80 JAV dolerių ant LED dalių ir pastatiau šviestuvą. Tai nebuvo pakankamai ryški, kad matytumėte ilgas plonas ląsteles, todėl aš praleidau 825 dolerius aukščiausios kokybės filtruose, išgelbėjau seną mikroskopo okuliarą kaip fokusavimo objektyvą, ir naudodavau santechnikos armatūra, kad ją pritvirtintumėte ant mikromanipuliatoriaus, kurį mes turime laboratorijoje. Tada aš galėčiau pasirinkti savo mažiausią kirminą, kelti patikimą blizgesį kirminų lervas ir baigti eksperimentus. Jei buvau stebėjęs didesnę GFP funkciją arba naudoju raudoną fluorescencinį baltymą, tikriausiai galėjau naudoti pigius filtrus ir padaryti viską po $ 100. Jei norėčiau tęsti savo eksperimentus, galėčiau naudoti šį šviestuvą, peržengdamas GFP padermes ir pažiūrėdamas, kurie palikuonys turi abu GFP žymenis. “

Kathryn disertacijos patarėjas paskatino tokio tipo eksperimentus, nes jis ir jo paties disertacijos patarėjas sukūrė savo DIY įrangą, kad aptiktų nervų laidumo greitį nedideliame gėlavandeniame angele. Prototipas vis dar kabo ant skelbimų lentos virš jo stalo. Jis ne tik moko gyvūnų fiziologijos studentus, kaip neinvaziškai atlikti neurofiziologiją, jis ir jo moksleiviai paskelbė dokumentus, naudodami šį metodą duomenims rinkti. Jis yra „Backyard Brains Spiker Box“ gerbėjas ir tikisi, kad jis bus veikiamas.

Kathryn galėjo baigti baigti savo darbą, nulaužęs savo įrankį, nepatirdamas pernelyg didelių išlaidų, kad įsigytų tūkstančius dolerių vidutinį apšvietimą. Šviestuvas yra naudingas bet kokiems DIY mokslininkams, kuriems reikia peržiūrėti GFP arba RFP (raudonųjų fluorescencinių baltymų) genų ekspresiją bakterijose arba c. elegans. Ir Kathryn yra įrodymas, kad galite tai padaryti kasdien.

Išsami informacija apie pagrindinį GFP apšvietiklį iš „Worm Breeder“ žiniaraštis yra žemiau (po šuolio). Jei norite sužinoti daugiau apie „Kathryn“ patobulinimus ir pamatyti savo pastabas ant kirminų, patikrinkite jos įrašą Puikios spalvos.

[Kreditas Ian Chin-Sang ir Weiwei Zhong]

Naudojant šviesos diodus kaip pigių šaltinį GFP ir DsRED aptikti

Ian Chin-Sang1 ir Weiwei Zhong Biologijos katedra, Karalienės universitetas, Kingstonas, Kanada, 2 Biochemijos ir ląstelių biologijos katedra, Rice universitetas, Hiustonas TX Susirašinėjimas: Weiwei Zhong ([email protected])

Fluorescencijos aptikimo komponentai yra per brangūs, kad juos būtų galima įdiegti į kiekvieną stereoskopą. Dažnai mūsų fluorescenciniai žymekliai yra labai ryškūs ir nereikalauja visiško tokios įrangos pajėgumo. Čia pateikiame LED įrenginį, kuris kainuoja tik apie $ 100 ir gali aptikti šviesius fluorescuojančius žymenis, tokius kaip myo-2 :: GFP. Sąranka (1 pav.) Susideda iš:

  • X-acto padedant rankoms ar nieko, kas gali pozicionuoti LED („Amazon.com“)
  • Lempos laidas, turintis jungiklį (vietinę techninę parduotuvę)
  • 17 vatų Xitanium LED vairuotojas (LED tiekimas)
  • Xitanium vairuotojo jungtis (LED tiekimas)
  • Šaldytuvas (LED tiekimas)
  • Taškinis objektyvas (LED tiekimas)
  • „Luxeon V Star“ optinis laikiklis (LED tiekimas)
  • „Royal-Blue Luxeon V Star“ LED, skirtas GFP aptikimui (LED tiekimas), arba „Green Luxeon V Star“ lemputė dsRED aptikimui (LED tiekimas)
  • Pasirinktinis sužadinimo filtras: Roscolux # 4290 CalColor 90 Mėlyna GFP, arba # 389 Chroma Green dsRED (Rosco.com | Edmund Optics)
  • Emisijos filtras: Roscolux # 12 „Straw“, skirtas „GFP“, arba # 19 „Fire for dsRED“ (prieinamumas toks pat kaip sužadinimo filtrai)

Išsami informacija apie tai, kaip iš tikrųjų įdėti šį prietaisą kartu, yra čia ir čia.

1 pav. LED nustatymas

2 pav. Naudojant šviesos diodų nustatymą, nustatant mio-2 :: GFP mIn1 gyvūnui.

3 pav. Naudojant šviesos diodų nustatymą, nustatant myo-2 :: dsRED.

Montuodami šviesos diodą prie vairuotojo, įsitikinkite, kad šviesos diodo +/- galai ir žibinto laido neutralieji / linijos galai atitinka vairuotojo galus. Objektyvo laikiklį ant šviesos diodo laikiklio naudokite neelektriniu klijais, pvz., Silikono klijais (Devcon, dalis Nr.12045, vietinė techninė parduotuvė). Žadinimo filtras gali būti priklijuotas prie objektyvo naudojant nedidelį kiekį klijų ant krašto. Išmetimo filtras gali būti tiesiog užsandarintas pagal mikroskopo tikslą.

Šis nustatymas turi ilgą eksploatavimo laiką, nereikalauja apšilimo ar vėsinimo laiko ir neturi radiacijos. Tačiau jis gali aptikti tik stiprius signalus. Mes naudojome sąranką, kad aptiktų šiuos žymenis: myo-2 :: GFP (2 pav.), Sur-5 :: GFP, ajm-1 :: GFP ir myo-2 :: dsRED (3 pav.).

Naudojant šviesos diodus kaip pigių šaltinį GFP ir DsRED aptikti


Bio: Eri Gentry yra biotechnologijų verslininkas, pilietinio mokslo bendruomenės organizatorius ir „BioCurious“, pirmosios biotechnologijos hackerspace, įkūrėjas San Francisko įlankos regione.



Jums Gali Būti Įdomu

Inovacijos iš viso pasaulio „Gather“ „Maker Faire Rome“

Inovacijos iš viso pasaulio „Gather“ „Maker Faire Rome“


„Maker Pro News“: kodėl „Makerspace“ turėtų priimti darbo mugę

„Maker Pro News“: kodėl „Makerspace“ turėtų priimti darbo mugę


„Maker Pro News“: kodėl ši rizikos kapitalo įmonė investuoja į kūrėjus

„Maker Pro News“: kodėl ši rizikos kapitalo įmonė investuoja į kūrėjus


Savaitės patarimai: „Crayon Finishes“, virtuviniai plaktukai, maudymosi lentos ir puikus iš uosto krovinių

Savaitės patarimai: „Crayon Finishes“, virtuviniai plaktukai, maudymosi lentos ir puikus iš uosto krovinių






Naujausios Žinutės